reverse-ChIP

      反向染色质免疫共沉淀技术（reverse Chromatinimmunoprecipitation, reverse-ChIP），是一种与ChIP互补的实验技术。相对ChIP技术使用目标蛋白抗体，沉淀捕获蛋白质-DNA复合物，分析验证蛋白质所结合的DNA。Reverse-ChIP是根据已知DNA序列信息，设计带标记基团（如生物素）的探针，使用探针与交联后的DNA—蛋白质进行杂交，通过磁珠捕获“探针-DNA-蛋白质复合物”，最后通过质谱或Western Blot检测分析与目标DNA区域结合的蛋白质。

技术流程概述：

1、探针设计

根据目标DNA区域序列，设计合成一条或多条带标记基团（如生物素基团）的寡核苷酸探针。

2、交联

紫外交联，稳定和加强样品中蛋白质（复合物）与DNA的相互作用。

3、DNA提取与片段化

提取培养细胞或组织的DNA-蛋白质，随后利用超声破碎仪将基因组DNA打断成200-500bp左右的片段。

4、DNA与探针变性

片段化后的蛋白质-DNA复合物，在杂交缓冲液的体系中，加热变性，使DNA双链解链，为后续探针杂交做准备。探针也在合适的条件下变形预处理，消除可能的二级结构。

5、杂交

加入探针与蛋白质-DNA复合物进行杂交孵育，使探针与目标DNA序列互补配对

6、捕获与纯化

使用偶联相应亲和基团（如链霉亲和素）的磁珠或琼脂糖微球，结合捕获“探针-DNA-蛋白质复合物”，通过离心或磁力架分离纯化，富集“探针-DNA-蛋白质复合物”。

7、洗脱与收集

洗脱琼脂糖微珠或磁珠，并收集与目的DNA结合的蛋白质。

8、检测分析

通过质谱或者Western blot分析目标蛋白质

客户提供的材料与信息：

1、基因信息或目标DNA序列信息

2、目标蛋白信息或抗体

3、细胞样本不低于2×10^8个细胞

4、组织样本不低于1g