免疫共沉淀（Co-IP）

免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation，Co-IP）是以抗体-抗原特异结合为基本原理，研究蛋白-蛋白相互作用，确定两种蛋白在细胞内是否具有生理性相互作用的经典实验方法。细胞在非变形条件下裂解，尽量保持蛋白与蛋白间的相互作用；然后使用预先交联处理的目标蛋白A的抗体-磁珠复合物，对目标蛋白A及其互作蛋白进行捕获富集；其后对富集的蛋白产物进行SDS-PAGE、Western blotting或质谱等分析。

技术流程概述：

1、抗体与磁珠交联预处理

使用特定交联剂，将目标蛋白的特异抗体与磁珠交联，洗涤后重悬于IP缓冲液中；

2、组织或细胞蛋白裂解提取

组织样本使用液氮冷冻研磨后加入预冷的非变性裂解液；细胞样本收集洗涤后加入预冷的非变性裂解液。混合物冰浴裂解，定期震荡混匀；其后离心收集上清，蛋白定量后待测；

3、免疫共沉淀

蛋白粗提液中，加入经交联处理的抗体-磁珠，并加入蛋白酶抑制剂，4℃冰箱混匀孵育过夜；其后离心或磁力架收集特异结合的蛋白-抗体-磁珠复合物；

4、纯化与回收

所收集蛋白样本使用洗脱缓冲液洗脱，获得目标蛋白及其互作蛋白

5、蛋白检测分析

后续进行SDS-PAGE、Western blotting或质谱分析。

结果展示：

客户提供的材料与信息：

1、目的蛋白及其互作蛋白的信息或抗体；

2、细胞样本不低于2×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g。