acRIP技术服务

RNA乙酰化免疫共沉淀（Acetylated RNA immunoprecipitation，acRIP），是研究RNA乙酰化修饰的实验技术。在RNA乙酰化修饰之中，N4-acetylcytidine(ac4C) ，即N4乙酰胞嘧啶修饰，是保守且丰度较高的RNA乙酰化修饰，是RNA乙酰化修饰研究中主要的研究目标。其实验原理为使用特异抗乙酰化抗体（如主要使用anti-ac4C），识别结合含有N4乙酰胞嘧啶修饰的RNA序列，形成抗体-RNA复合物，通过与免疫共沉淀相似的方法，利用琼脂糖微珠或磁珠捕获并富集得到ac4C修饰的RNA片段，纯化后利用qPCR或高通量测序分析所得的RNA序列片段。

技术流程概述：

1、细胞裂解与RNA提取

组织先裂解重悬为单细胞悬液；裂解培养细胞或者组织细胞悬液，提取总RNA，并用DNA酶消化内源性DNA，降低干扰。

2、RNA质检与定量

3、RNA片段化

使用超声处理RNA样品，是RNA打断为约平均100nt的片段。

4、免疫沉淀

使用特异性抗体结合目的甲基化位点，再以Protein A、Protein G 或Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠捕获抗体获取目的抗体-RNA复合体，通过离心或磁力架分离纯化目的抗体-RNA复合物。

5、收集与RNA重抽提

利用洗涤液清洗收集的微珠/磁珠抗体-RNA复合物，其后加入蛋白酶K消化，释放RNA；使用提取试剂，重新抽提RNA。

6、分析检测

通过qPCR或高通量测序检测分析获得的RNA。

结果展示：

1、qPCR结果

2、NGS结果示例

客户提供的材料与信息：

1、目标RNA位点信息

2、细胞样本，细胞量不低于3×10^7个细胞

3、组织样本不低于1g

4、或实验方案设计