蛋白质修饰检测

蛋白质水平的修饰在细胞内的信号传导、功能调控等多个方面发挥着重要的作用。蛋白质的磷酸化、泛素化、甲基化、乙酰化、糖基化、SUMO化等修饰常作为基因调控的重要方面而备受关注。

其中蛋白质的泛素化、甲基化、乙酰化、SUMO化等修饰可通过免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）联合免疫印迹（WesternBlot，WB）进行检测。其实验原理是首先利用特异性抗体，特异结合具有某一种修饰的蛋白质，利用琼脂糖微珠或磁珠捕获并富集。最后应用免疫印迹（WB），检测富集的蛋白混合物中是否含有目标蛋白质。

不同的蛋白修饰类型：

技术流程概述：

1、蛋白裂解

裂解细胞或组织，离心分离，获得可溶性总蛋白；

2、免疫沉淀

    使用针对所研究的蛋白修饰的特异抗体（如anti-ubiquitin），偶联Protein A、Protein G 或Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠捕获抗体-蛋白复合物，通过离心或磁力架收集使抗体-蛋白复合物与其他非目标组分分离；

3、洗脱与收集

洗脱琼脂糖微珠或磁珠，并收集所得蛋白质；

4、免疫印迹检测

使用目标蛋白抗体，检测所得蛋白混合物中是否含有目标蛋白，以研究目标蛋白的蛋白修饰变化。

客户提供的材料与信息：

1、目标蛋白质信息，所研究的蛋白修饰信息；

2、细胞样本，细胞量不低于3×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g；

4、或实验方案设计。