RIP

RNA免疫共沉淀（RNA Immunoprecipitation，RIP）是研究目标RNA结合蛋白（RNA binding protein，RBP）与RNA相互作用的经典方法。实验原理为使用目标RBP的特异抗体结合富集目标RBP-RNA复合物，再经过琼脂糖微珠或磁珠获取目标RBP-RNA复合物，纯化后利用qPCR或高通量测序分析目标RBP所结合的RNA序列。该技术广泛用于筛查和明确调控RNA（尤其是非编码RNA）的蛋白质，如RNA甲基化修饰酶、RNA剪切酶等。

技术流程概述：

1、交联

使用可逆性交联剂，稳定和加强样品中蛋白质（复合物）与RNA的相互作用，较常用的交联剂为终浓度1%甲醛。

2、裂解细胞与去除DNA

组织先裂解重悬为单细胞悬液；裂解培养细胞或者组织细胞悬液，并用DNA酶消化内源性DNA，降低干扰。

3、免疫沉淀

使用特异性抗体结合目的RBP，再以Protein A、Protein G 或Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠捕获抗体获取目的RBP-RNA复合体，通过离心或磁力架分离纯化目的RBP-RNA复合物。

4、收集RNA

利用洗脱液洗脱洗脱微珠或磁珠，并收集与目的RBP结合的RNA

5、分析检测

通过qPCR或高通量测序检测分析获得的RNA。

结果展示：

客户提供的材料与信息：

1、目标RBP信息，或相应RBP抗体；

2、细胞样本不低于2×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g；

4、针对RIP-qPCR，建议提供可能结合的RNA信息。