DNA pulldown

DNA pulldown是在体外研究已知DNA区域与蛋白质相互作用的实验技术。实验原理为利用生物素标记的目标DNA双链片段与细胞核或者线粒体的蛋白提取物共孵育，获得能与目的DNA片段结合的蛋白质，随后洗脱不能结合或非特异结合的蛋白质，最后对分离纯化的蛋白进行WB或质谱分析。该技术广泛用于验证DNA与反式作用因子（如转录因子）和组蛋白修饰酶等蛋白质的结合。

技术流程概述：

1、生物素标记的DNA双链片段合成制备

以目标DNA为模板，设计合成与目标DNA序列一致的生物素标记DNA双链片段。

2、细胞和或线粒体提取

提取培养细胞或者组织的细胞核或者线粒体并裂解，离心去除沉淀后收集裂解物。

3、去除DNA

利用DNA酶处理所得裂解物以去除内源性DNA。

4、Pulldown

生物素标记的目标DNA片段与去除内源性DNA的裂解物共孵育，使生物素标记的DNA片段与蛋白质充分结合。

5、捕获与纯化

使用偶联链霉亲和素的琼脂糖微珠或磁珠捕获生物素标记的目标DNA片段获得目标DNA-蛋白质复合物，通过离心或磁力架分离纯化目标DNA-蛋白质复合物。

6、收集与检测

洗脱收集所获得的蛋白质，其后通过WB或质谱进行检测分析。

结果展示：

客户提供的材料与信息：

1、基因片段信息、待验证的结合蛋白信息等；

2、细胞样本，细胞量不低于3×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g。