ChIP

染色质免疫沉淀技术（Chromatin immunoprecipitation, ChIP），是研究特定目的蛋白质与DNA相互作用的实验技术。实验主要原理是通过固定细胞内蛋白质-DNA复合物，再随机将基因组DNA打断为小片段，利用抗原-抗体特意结合的特性，使用特定抗体结合富集目的蛋白及与其结合的DNA片段。通过对相应DNA片段进行高通量测序（ChIP-seq）或者qPCR（ChIP-qPCR）检测，获得与目的蛋白质互作的DNA信息。该技术广泛用于反式作用因子（如转录因子）对基因组的调控，以及组蛋白修饰酶对基因转录的调控等。

技术流程概述：

1、交联

使用可逆性交联剂，稳定和加强样品中蛋白质（复合物）与DNA的相互作用，较常用的交联剂为终浓度1%甲醛。

2、细胞核或者线粒体提取与基因组片段化

提取培养细胞或者组织的细胞核或线粒体后裂解并收集基因组DNA和蛋白质，随后利用超声破碎仪将基因组DNA打断成200-500bp左右的片段。

3、免疫沉淀

使用特异性抗体结合目的蛋白质，再以偶联Protein A、Protein G 或Protein A/G的琼脂糖微珠或磁珠捕获抗体-目的蛋白质-DNA复合物，通过离心或磁力架收集使目的蛋白质-DNA复合物与其他非目标组分分离。

4、纯化与回收

通过不同buffer的洗涤、洗脱，纯化收集目标蛋白质-DNA复合物，其后通过解交联和沉淀回收DNA片段

5、富集DNA的检测分析

通过qPCR、杂交芯片、高通量测序等方法分析所富集的DNA片段信息，最终确定富集DNA的序列信息。

结果展示：

客户提供的材料与信息：

1、目标蛋白质信息，或相应ChIP级别抗体；

2、细胞样本不低于2×10^7个细胞；

3、组织样本不低于1g。

4、针对ChIP-qPCR，建议提供可能结合的DNA信息。