常规实验(Conventional experiments)
实验项目 (Experiment items) | 检测方法 (Methods) | 样品 (Samples) |
基因表达 (Gene expression) | 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR)/免疫印迹(Western blot,WB)/酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 组织/细胞/体液/培养基(Tissues/Cells/ Body fluid/Culture medium) |
获取全长cDNA (Obtain full-length cDNA) | cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE) | 组织/细胞 (Tissues/Cells/) |
亚细胞定位 (Subcellular localization) | 核酸(Nucleic acid):DNA/RNA荧光原位杂交(DNA/RNA FISH) | 组织/细胞 (Tissues/Cells/) |
蛋白质(Protein):免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)/免疫荧光(Immunofluorescence,IF) | 组织/细胞 (Tissues/Cells/) | |
细胞增殖/活性 (Cell proliferation/viability) | CCK-8/克隆形成 (Clone formation) | 细胞 (Cells/) |
细胞程序性死亡 (Cell programmed death) | Annexin V染色&流式细胞仪检测(Annexin V staining & Flow cytometric analysis)/脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL) | 组织/细胞 (Tissues/Cells/) |
细胞周期 (Cell cycle) | PI染色&流式细胞仪检测(PI staining & Flow cytometric analysis) | 细胞 (Cells) |
细胞迁移 (Cell migration) | 划痕实验(Scratch assay)/Transwell | 细胞 (Cells) |
细胞侵袭 (Cell invasion) | Transwell | 细胞 (Cells) |
基因调控作用 (Gene regulatory effect) | 荧光素酶报告基因系统(Luciferase reporter gene assay) | 细胞 (Cells) |
载体构建 (Construction of plasmid) | 克隆&连接(Clone & Ligation) |
转运RNA(transfer RNA,tRNA)衍生的tsRNA(tRNA-derived small RNA)是一类新型的小非编码RNA(small non-coding RNA, sncRNA)。TsRNA包括tiRNA(tRNA-derived stress inducible RNA)和tRF(tRNA-derived fragment),主要定位于细胞质中。其中,tiRNA是来源于成熟tRNA剪切形成的半分子,包括5’-和3’-tRNA半分子,长度约30-35nt(如图1)。而tRF是来源于成熟tRNA或前体tRNA的小片段,并根据其在tRNA上对应的位置可进一步分为tRF-5,tRF-3, tRF-1和i-tRF等,长度约为15-30nt(如图1)。
现有研究发现tsRNA有以下几种作用机制:
(1)以类似microRNA的方式参与RNA干扰,包括与AGO蛋白形成复合体结合靶基因mRNA 3’ UTR来抑制后者靶基因表达,以及与tRNA核酸内切酶结合后引导tRNA核酸内切酶切割靶基因mRNA来降低靶基因表达;
(2)结合YBX1等RNA结合蛋白调控靶基因mRNA的稳定性;
(3)调控靶基因mRNA翻译。
通过上述作用机制,tsRNA参与免疫紊乱、代谢紊乱、神经性病变和癌症等多种疾病的发生和发展。
图1 tsRNA生成和分类(引用自“Deciphering the tRNA-derived small RNAs: origin, development, and future”)
目前,本司针对tsRNA可提供以下服务:
(1)检索tsRNA在癌症中的表达情况以及预后价值(prognosis value)
利用公开的现有数据检索tsRNA在多种癌症中的表达情况以及预后价值。
(2)分析tsRNA潜在靶基因和功能
利用生物信息学分析tsRNA潜在靶基因以及tsRNA参与的生理过程和分子通路。
(3)合成tsRNA mimic和inhibitor
根据tsRNA序列设计并合成tsRNA mimic和inhibitor。
(4)检测tsRNA的组织和细胞表达和定位
分别利用实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR,qPCR)荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)检测tsRNA在组织和细胞中的表达和定位。
(5)检测tsRNA与靶基因mRNA结合
利用miRNA pulldown、反义RNA纯化技术(RNA Antisense Purification,RAP)等技术检测tsRNA与靶基因mRNA的结合,详情请查看我司“技术服务”-“RNA与RNA的相互作用”。
(6)检测tsRNA与RNA结合蛋白结合
利用miRNA pulldown、RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)等技术检测tsRNA与靶基因mRNA的结合,详情请查看我司“技术服务”-“RNA与蛋白质的相互作用”。
(7)检测tsRNA对靶基因表达的调控作用
利用双荧光素酶报告基因系统检测tsRNA对靶基因表达的调控作用。
(8)检测tsRNA对靶基因mRNA稳定性的影响
利用放线菌D处理法检测tsRNA对靶基因mRNA稳定性的影响,详情请查看我司“技术服务”-“RNA稳定性研究”。
(9)检测tsRNA修饰
利用RNA甲基化免疫共沉淀(Methylated RNA immunoprecipitation,MeRIP)检测tsRNA甲基化以及利用RNA乙酰化免疫共沉淀(Acetylated RNA immunoprecipitation,acRIP)检测tsRNA乙酰化,详情请查看我司“技术服务”-“RNA修饰研究”。
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